利用抗原和抗體的特異性結(jié)合特性，通過免疫分析技術(shù)可以對細(xì)胞因子進行定量或定性檢測。盡管細(xì)胞因子的種類很多，但只要獲得針對細(xì)胞因子的特異性抗體（包括多克隆或單克隆抗體），就可以采用免疫分析法進行檢測。常用的方法包括ELISA、RIA、Western blotting、免疫熒光以及基于免疫熒光技術(shù)的流式細(xì)胞術(shù)分析。

1. 酶聯(lián)免疫吸附法

ELISA是應(yīng)用廣泛的異質(zhì)酶標(biāo)記免疫分析技術(shù)。一步或多步抗原抗體反應(yīng)和一步酶促反應(yīng)構(gòu)成了ELISA的基本步驟，可用于定性或定量分析。雙抗體夾心法是細(xì)胞因子測定常用的方法。該方法中使用的抗體可以是針對同一抗原的多克隆抗體或針對同一抗原的不同表位的單克隆抗體。

細(xì)胞因子測定的標(biāo)本主要包括兩類，一類是血清（血漿）、滑液、胸水、腦脊液或腹膜液等體液，可用于細(xì)胞因子和可溶性粘附分子的檢測；另一種是體外培養(yǎng)后的細(xì)胞培養(yǎng)。上清液僅用于細(xì)胞因子的檢測。

ELISA方法具有特異性強、簡便、易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。此外，該方法還可以檢測無生物活性的細(xì)胞因子前體、分解片段以及與相應(yīng)受體的綴合物。缺點是靈敏度較低，無法判斷細(xì)胞因子的生物活性。

2. 流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞術(shù)是一種基于熒光抗體染色技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)靈敏分辨率的方法。該方法主要用于細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子和細(xì)胞表面粘附分子的檢測。通過特異性熒光抗體染色，可以簡單快速地進行單細(xì)胞水平的細(xì)胞因子或粘附因子的檢測，并且可以準(zhǔn)確確定不同細(xì)胞亞群的檢測。細(xì)胞因子和膜分子的表達(dá)。根據(jù)熒光抗體的性質(zhì)，熒光抗體染色可分為直接法和間接法。前者使用熒光標(biāo)記的細(xì)胞因子或粘附分子的特異性抗體，而后者則使用熒光標(biāo)記的二抗。直接法較為常用，雖然其靈敏度不如間接法，但特異性強。

該方法檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子時，主要包括以下基本步驟：

1. 待測細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

2. 細(xì)胞固定常用的細(xì)胞固定液為4%多聚甲醛。

3. 封閉非特異性結(jié)合位點 用含有 5% 脫脂奶粉和鈣、鎂離子的 PBS 溶液重懸固定的細(xì)胞。

4.染色與分析采用熒光素標(biāo)記的細(xì)胞因子特異性單克隆抗體進行熒光抗體染色，流式細(xì)胞儀分析熒光陽性細(xì)胞百分率和熒光強度。另外，如果使用兩種或多種細(xì)胞因子的不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，則可以同時檢測同一細(xì)胞中兩種或多種不同的細(xì)胞因子。

該方法還可用于區(qū)分具有不同分泌特性的細(xì)胞亞群，例如 Th1 和 Th2 細(xì)胞。

3.酶聯(lián)免疫斑點法

酶聯(lián)免疫斑點試驗（ELISPOT），源自ELISA，但突破了傳統(tǒng)ELISA，是抗體形成細(xì)胞定量測定的延伸和發(fā)展，已越來越多地應(yīng)用于類風(fēng)濕因子、IFN-γ等細(xì)胞因子的定量測定的分泌細(xì)胞。

ELISPOT優(yōu)于傳統(tǒng)的抗體、細(xì)胞因子或其他可溶性分子分泌細(xì)胞檢測方法，可以檢測20萬至30萬個細(xì)胞中1個分泌相應(yīng)分子的細(xì)胞。如果引入生物素和親和素系統(tǒng)，則很敏感。做ELISPOT時，所選的特異性抗體應(yīng)具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的特點。所選的細(xì)胞激活劑不得影響細(xì)胞的分泌功能。

4. 免疫測定的方法學(xué)評價
免疫測定可用于檢測幾乎所有細(xì)胞因子。與生物活性測定相比，主要優(yōu)點和缺點是：

優(yōu)點：①特異性高，使用特異性單克隆抗體可用于單一細(xì)胞因子的檢測； ②操作簡單、快速，不需要依賴細(xì)胞系，因此不需要維持培養(yǎng)，大大增加了方法的可操作性，易于普及，便于普查； ③影響因素相對較少且易于控制，重復(fù)性好，方法易于標(biāo)準(zhǔn)化。

缺點：①測量的只是細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)含量，與其生物活性不一定成正比； ②測定結(jié)果與所用抗體的來源和親和力有很大關(guān)系。當(dāng)使用具有不同親和力的mAb時，檢測到相同的樣品。結(jié)果可能會有所不同； ③靈敏度較低，比生物活性法低10～100倍左右，測定下限一般為100pg； ④ 如果樣品中存在可溶性細(xì)胞因子受體，可能會影響細(xì)胞因子特異性抗體的結(jié)合。

除了上述方法外，分子生物學(xué)技術(shù)（也是生物測定方法）也廣泛應(yīng)用于細(xì)胞因子或粘附分子的檢測，例如PCR/RT-PCR、斑點印跡、Northern-blot和FISH。細(xì)胞或組織原位雜交等

其他免疫分析：偏振熒光檢測技術(shù)；使用共焦激光顯微鏡；發(fā)光技術(shù)；免疫組織化學(xué)染色。這些方法在粘附分子、細(xì)胞因子及其分泌細(xì)胞的檢測中發(fā)揮著積極的作用。