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弱堿性分析物和 SPE EVOLUTE®CX 如何工作?

更新時間:2023-07-25      點擊次數(shù):418

我們知道化合物可以是酸性、堿性和中性的。查看 pKa 和官能團(tuán)可以幫助我們進(jìn)一步選擇正確的 SPE 吸附劑,并更好地了解它如何與我們感興趣的分析物配合使用。我們來看看復(fù)合多巴胺:

多巴胺的結(jié)構(gòu)

圖 1.多巴胺的結(jié)構(gòu)。

當(dāng)我們觀察結(jié)構(gòu)時,我們可以看到通過苯環(huán)的共軛。這種結(jié)合將增加我們的疏水鍵合。現(xiàn)在讓我們看看官能團(tuán)的 pKa。

多巴胺pKa

圖 2.每次 Chemicalize 添加多巴胺 pKa。

在圖 2 中,我們可以看到酸性醇官能團(tuán)的 pKa 為 9.80,胺堿性官能團(tuán)的 pKa 為9.13。記住一般化學(xué)的一些基礎(chǔ)知識,我們知道強(qiáng)酸和強(qiáng)堿在幾乎整個可用的 pH 范圍內(nèi)都會被電離。對于弱酸和弱堿來說,情況正好相反。弱酸和弱堿的電離可以通過控制 pH 值來控制(有效地打開或關(guān)閉)。那么什么是強(qiáng)與弱呢?讓我們看一下EVOLUTE® Express 用戶指南中的吸附劑化學(xué)選擇指南


Evolute Express 吸附劑選擇圖 3。查看分析物功能列,我們可以看到每個類別的 pKa 范圍,我們將使用它來幫助我們確定用于分析的最佳吸附劑化學(xué)性質(zhì)。


酸性官能團(tuán)的 pKa 值低于弱酸性分析物官能團(tuán)的 9.80 和 13.02。所以我們知道這些不是我們可以利用的東西。堿性官能團(tuán) pKa 為 9.13,這屬于我們的“弱堿性"類別。這意味著它在中性或酸性 pH 環(huán)境中將保持正電荷。有關(guān) pH 調(diào)節(jié)的快速回顧,請參閱pH 調(diào)節(jié)樣品制備博客。由于我們有一個弱堿性官能團(tuán),我們將通過使用 EVOLUTE®CX 吸附劑來利用離子交換潛力。

Evolute CX 吸附劑

圖 4. EVOLUTE Express CX 吸附劑,請注意改性聚苯乙烯二乙烯基苯聚合物,它使吸附劑具有水潤濕性。

CX 吸附劑具有非極性(疏水性)和強(qiáng)陽離子交換功能。有一個帶負(fù)電的磺酸官能團(tuán),可保留帶正電的分析物。我們可以在圖 4 中看到疏水性和離子相互作用。酸性官能團(tuán)的 pK a約為 -7,這告訴我們它將在整個pH 范圍內(nèi) 100% 電離。我們還可以看到結(jié)構(gòu)的反相相互作用部分,該部分將允許疏水 相互作用。

5. 在這里,我們可以看到裝載過程中 CX 吸附劑和帶電多巴胺分子之間發(fā)生疏水相互作用的位置。我們還看到同時發(fā)生的離子相互作用,從而產(chǎn)生混合模式相互作用。

現(xiàn)在讓我們看看 CX 吸附劑中的每個步驟是如何發(fā)生的,如《濫用藥物尿液檢測的現(xiàn)行方法》中所示。

在此示例中,我們使用人血清,并將使用EVOLUTE®EXPRESS CX 30 mg 96 孔板部件號:601-0030-PX01。

描述發(fā)生了什么?
樣品前處理100 µL 4% H 3 PO 4

稀釋樣品將有助于降低粘度,使其更容易流過 SPE 吸附劑。

記住 pH 規(guī)則,我們會將樣品預(yù)處理至比 pK a低 2 個單位,以確保分析物 100% 電離。

磷酸的添加將確保我們的堿性官能團(tuán)的最大電離。

條件(可選)1毫升甲醇由于具有水可濕性官能團(tuán)和玻璃料,因此在使用 EVOLUTE Express 系列時這是可選的。
正壓

建議正壓。

1 分鐘,2 小節(jié)

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

平衡(可選)1 毫升 4% H 3 PO 4

由于具有水可濕性官能團(tuán)和玻璃料,因此在使用 EVOLUTE Express 系列時這是可選的。

正壓

建議正壓。

1 分鐘 2 小節(jié)

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

樣品加載200 µL 預(yù)處理樣品這在建議的負(fù)載能力范圍內(nèi)。
正壓

建議正壓。

1 分鐘,0.5 巴

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

洗1

1000 µL 4% H 3 PO 4

保持基本官能團(tuán)的最大電離。

去除極性干擾,例如鹽和小蛋白質(zhì)。

正壓

建議正壓。

1 分鐘,0.8 巴

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

洗21 mL 50:50 甲醇/水

消除疏水相互作用,同時釋放疏水化合物,例如磷脂和溶血磷脂。

正壓

建議正壓。

1 分鐘,0.8 巴

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

洗脫2 x 750 µL 78:20:2 二氯甲烷/甲醇/和氫氧化銨

添加堿性緩沖液將中和分析物,破壞離子相互作用,從而從吸附劑中釋放分析物。

有機(jī)溶劑將破壞與分析物之間任何剩余的疏水相互作用。

正壓

建議正壓。

1 分鐘,0. 巴

正壓避免了井間流量的變化。

通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。

干燥空氣流或氮氣流通常優(yōu)選使用氮氣來防止氧化,并且氮氣的純度可以防止污染。
重構(gòu)90:10 0.1 甲酸水溶液/ 0.1% 甲酸甲醇溶液適合質(zhì)譜分析的溶劑。


















































CX 樣品制備的典型過程基于目標(biāo)分析物的反相/疏水相互作用和離子交換能力。在圖 4 中,我們提到了聚合物吸附劑的額外優(yōu)勢。為什么這很重要?在傳統(tǒng)的硅膠基 SPE 中,您必須調(diào)節(jié)和平衡疏水性的吸附劑和篩板。對于這種聚合物 SPE 產(chǎn)品,吸附劑和篩板都是水可潤濕的,并且對于水性樣品,吸附劑能夠與樣品相互作用,而無需調(diào)節(jié)和平衡。這還有一個好處是可以消除分析過程中孔干燥的可變性。如果您使用 96 孔板并且 A1 孔可能在 H12 之前幾分鐘被溶劑化,這尤其有用;EVOLUTE Express 系列的水潤濕能力可最大限度地降低孔干燥和應(yīng)用結(jié)果中孔與孔之間差異的風(fēng)險。



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