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Caprico Biotechnologies流式細(xì)胞抗體該如何選擇?

更新時間:2022-11-02      點擊次數(shù):1471
  Caprico Biotechnologies流式細(xì)胞抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件:目標(biāo)蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。在流式實驗過程中,盡量減少實驗工序和過程,以保證實驗的真實和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實驗而不去做間接標(biāo)記。
 
  由于在流式細(xì)胞實驗過程中,熒光抗體對單細(xì)胞懸液的標(biāo)記效果直接影響實驗的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此,需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素,例如抗體特異性、熒光素信號強(qiáng)弱、熒光素標(biāo)記方式、同型對照等。
 
  流式抗體的選擇: 
  1、流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件:目標(biāo)蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。
 
  2、流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實驗過程中,盡量減少實驗工序和過程,以保證實驗的真實和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實驗而不去做間接標(biāo)記。
 
  3、流式抗體熒光標(biāo)記的選擇:如果實驗中檢測單一指標(biāo):不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。FACS Calibur儀器為例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常來說,PE強(qiáng),適用于弱表達(dá)抗原。FITC強(qiáng)度較弱,適用于強(qiáng)表達(dá)抗原,使用范圍比較廣。用戶需根據(jù)檢測的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。
 
  如果同時檢測多個指標(biāo):確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測多少個通道:流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。如:實驗者同時檢測三個指標(biāo),可以在圖1中綠色、黃色和紅色三個通道中各選一個適當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記,F(xiàn)ITC、PE和PE-cy5。切忌所有指標(biāo)選擇同一個通道的熒光標(biāo)記,以防止熒光的重疊和相互干擾,影響最后結(jié)果。因此,流式細(xì)胞儀的通道越多,同一份樣本能同時做的表面/胞內(nèi)標(biāo)志就越多。常用熒光標(biāo)記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
 
  同型對照的選擇: 
  流式細(xì)胞實驗和其他抗體相關(guān)實驗有點不同的就是需要選擇同型對照。同型對照,是用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色,相當(dāng)于實驗的陰性對照。同型對照選擇與標(biāo)記抗體同種屬來源,同亞型,同熒光標(biāo)記的抗體。比如:抗人的CD3的PE標(biāo)記的抗體,小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE標(biāo)記的小鼠的IgG2a。
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